Ako urobiť test ELISA (enzýmovo viazaný imunosorbentový test)?
ELISA (enzýmovo viazaný imunosorbentný test) je test, ktorý zisťuje koncentráciu patogénov a alergénov nachádzajúcich sa v testovanej kvapaline.
ELISA (enzýmovo viazaný imunosorbentný test) je test, ktorý zisťuje koncentráciu patogénov a alergénov nachádzajúcich sa v testovanej kvapaline. Môže sa použiť na detekciu protilátok v krvi alebo mykotoxínov v potravinách. Táto príručka vám pomôže vo všeobecnosti vykonať jednoduchú ELISA s 8-jamkovými prúžkami.
Časť 1 zo 4: nastavenie
- 1Umiestnite všetky materiály na dosah ruky na pracovnú plochu.
- 2Umiestnite prúžky potiahnutých a nepotiahnutých jamiek do vaničky vo vhodnej orientácii.
- 3Otvorené pole s tipmi.
- 4Na koniec jednokanálovej pipety umiestnite špičku.
- 5Odsajte 100 µl jednej kontrolnej vzorky súpravy a naneste ju do jednej nepotiahnutej mikrojamky.
- 6Tieto posledné dva kroky zopakujte pre každú kontrolu súpravy a každú testovanú vzorku.
Časť 2 zo 4: počiatočná inkubácia vzorky
- 1Na každý koniec viackanálovej pipety umiestnite jednorazové špičky.
- 2Odsajte 100 µl z prúžku nepotiahnutých jamiek pomocou viackanálovej pipety a naneste do prúžku potiahnutých jamiek.
- 3Zlikvidujte špičky z viackanálovej pipety do blízkej nádoby na odpad.
- 4Krúžte jímkou s mikrojamkami 20 sekúnd plynulým kruhovým pohybom bez zdvíhania.
- 5Počkajte na zodpovedajúci čas zaznamenaný na vykonanie testu ELISA.
- 6Po uplynutí vhodného času vyprázdnite studne do umývadla pomocou silného ťahu nadol s jamkami otočenými hore dnom.
- 7Odstráňte prúžok s nepotiahnutými jamkami.
- 8Naplňte premývaciu fľašu vhodným premývacím roztokom.
- 9Každú jamku opláchnite 5 -krát umývacou fľašou.
- 10Otočte tanier s mikrojamkou hore dnom a poklepte ho na povrch pokrytý papierovou utierkou.
- 11Položte vyčistenú doštičku s mikrojamkami lícom hore na stôl.
Kvapalné vzorky na testovanie súpravou ELISA (nesmie prekročiť dostupné jamky mínus kontroly v súprave).
Časť 3 zo 4: Inkubácia konjugátu
- 1Vezmite jeden zásobník na pipetu a naplňte ho príslušným konjugátovým činidlom.
- 2Vezmite viackanálovú pipetu, na každý koniec položte jednorazové špičky a nasajte 100 µl zo zásobníka naplneného konjugátom.
- 3Nalejte do prúžku potiahnutých jamiek.
- 4Zlikvidujte špičky z viackanálovej pipety do blízkej nádoby na odpad.
- 5Krúžte jímkou s mikrojamkami 20 sekúnd plynulým kruhovým pohybom bez zdvíhania.
- 6Počkajte na zodpovedajúci čas zaznamenaný na vykonanie testu ELISA.
- 7Po uplynutí vhodného času vyprázdnite studne do umývadla pomocou silného ťahu nadol s jamkami otočenými hore dnom.
- 8Každú jamku opláchnite 5 -krát umývacou fľašou.
- 9Otočte tanier s mikrojamkou hore dnom a poklepte ho na povrch pokrytý papierovou utierkou.
- 10Položte vyčistenú doštičku s mikrojamkami lícom hore na stôl.
Časť 4 zo 4: substrát / konečná inkubácia
- 1Vezmite jeden zásobník na pipetu a naplňte ho zodpovedajúcim substrátovým činidlom.
- 2Vezmite viackanálovú pipetu, na každý koniec položte jednorazové špičky a nasajte 100 µl zo zásobníka naplneného substrátom.
- 3Nalejte do prúžku potiahnutých jamiek.
- 4Zlikvidujte špičky z viackanálovej pipety do blízkej nádoby na odpad.
- 5Krúžte jímkou s mikrojamkami 20 sekúnd plynulým kruhovým pohybom bez zdvíhania.
- 6Počkajte na zodpovedajúci čas zaznamenaný na vykonanie testu ELISA.
- 7Vezmite jeden zásobník pipety a naplňte ho príslušným červeným zastavovacím činidlom.
- 8Vezmite viackanálovú pipetu, na každý koniec položte jednorazové špičky a nasajte 100 µl zo zásobníka naplneného červeným zastavovacím činidlom.
- 9Odsajte nasatú kvapalinu do už naplneného prúžku mikrojamiek.
- 10Mikrovlnnou doskou otáčajte 20 sekúnd plynulým pohybom v smere hodinových ručičiek bez zdvíhania.
- 11Optimálne výsledky dosiahnete, ak podložku s mikrojamkami vložíte do 10 minút do čítačky mikrotitračných doštičiek ELISA.
Optimálne výsledky dosiahnete, ak podložku s mikrojamkami vložíte do 10 minút do čítačky mikrotitračných doštičiek ELISA.
- Namiesto ručného otáčania je možné použiť rotujúcu dosku.
- Prázdna doštička s mikrojamkou 8x12 (musí byť kompatibilná s prúžkami mikrojamky; môže byť v súprave)
- Čítačka mikrodoštičiek ELISA
- Jednokanálová pipeta
- 8-kanálová multipipeta
- Krabica 8x12 plná jednorazových špičiek (musí byť kompatibilná s použitými pipetami)
- Fľaša na umývanie so zakriveným plastovým hrotom
- 3 nádržky na pipety
- Papierová utierka
- Kvapalné vzorky na testovanie súpravou ELISA (nesmie prekročiť dostupné jamky mínus kontroly v súprave)
- Testovaná súprava ELISA (musí byť kompatibilná so testovanými vzorkami)
- Pokyny k súprave sú kompletné s časmi čakania
- Činidlo konjugátu
- Substrátové činidlo
- Činidlo s červeným zastavením
- Kvapalné vzorky použité ako kontrola
- Prúžok mikrojamky z 12 nepotiahnutých jamiek (musí byť kompatibilný s doštičkou s mikrojamkami)
- Prúžok mikrojamky s 12 potiahnutými jamkami (musí byť kompatibilný s doštičkou s mikrojamkami)
- Premývací roztok
Prečítajte si tiež: Ako urobiť karteziánskeho potápača?
